糖尿病自身免疫-胰島素抗體RIA試劑盒

僅供科研使用

糖尿病自身免疫-胰島素抗體RIA試劑盒

RSR 公司生產(chǎn)的胰島素自身抗體(Insulin Ab) RIA 檢測(cè)試劑盒僅用于定量檢測(cè)人類血清中胰島素抗體。需專業(yè)技術(shù)人員操作。

一、糖尿病自身免疫抗體檢測(cè)-胰島素抗體背景：
胰島β細(xì)胞自身抗體是I 型糖尿病（type 1 DM）重要的血清標(biāo)志物，該抗體可以識(shí)別抗原包括胰島素，谷氨酸脫羧酶（GAD65）和胰島細(xì)胞抗原IA-2、ICA-512以及鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8。

二、糖尿病自身免疫抗體檢測(cè)-胰島素抗體檢測(cè)原理：

在RSR 的胰島素自身抗體RIA 檢測(cè)方法中，受測(cè)血清在*步孵育中先與[^125I]-(A14)單碘胰島素結(jié)合，而后在第二步中與加入的抗人IgG 結(jié)合，使已形成的碘標(biāo)記的胰島素-抗胰島素抗體復(fù)合物產(chǎn)生沉淀。經(jīng)離心后經(jīng)測(cè)定碘125 的放射量可測(cè)得沉淀中胰島素抗體的濃度。本試劑盒測(cè)定范圍為0.4 至50u/mL(RSR單位)。

三、實(shí)驗(yàn)步驟：
所有試劑除緩沖液外使用前需室溫放置(20-25℃)至少30 分鐘；所有試劑使用前請(qǐng)混勻。在步驟2,4,5 中建議使用非一次性的Eppendorf 移液器。
1.各自向做好標(biāo)記的測(cè)定管中加入20μL 患者血清、陰性質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品和陽性
質(zhì)控品。實(shí)驗(yàn)推薦進(jìn)行雙管。
2.每支管中加入25μL 碘125 標(biāo)記的胰島素。準(zhǔn)備兩只額外的空管，向其中加入
標(biāo)記胰島素用以測(cè)定總計(jì)數(shù)。
3.使用渦旋攪拌器混勻每支測(cè)定管。室溫下隔夜孵育(16-20 小時(shí))。
4.每支管中加入100μL 抗人IgG。(總計(jì)數(shù)測(cè)定管除外)使用渦旋攪拌器混勻，蓋
好測(cè)定管，在2-8℃下孵育1 小時(shí)。
5.每支管仲加入2mL 冷藏溫度(2-8℃)的緩沖液(總計(jì)數(shù)測(cè)定管除外)。使用渦旋攪
拌器混勻，在4℃下使用冷凍離心機(jī)1500g 離心20 分鐘。
6.離心完成后棄去上清液。請(qǐng)留意操作，不要損失沉淀物。
7.重復(fù)步驟5 和步驟6.
8.使用gamma 計(jì)數(shù)器測(cè)量每支管(含總計(jì)數(shù)測(cè)定管)，測(cè)量一分鐘。