淺析肌聯(lián)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒的使用流程
更新時(shí)間：2025-01-10 點(diǎn)擊次數(shù)：142次
肌聯(lián)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒是一種用于檢測(cè)人血清或血漿中肌聯(lián)蛋白抗體(TitinAb)的實(shí)驗(yàn)工具。該試劑盒在臨床上具有重要的應(yīng)用價(jià)值，尤其在重癥肌無(wú)力(Myasthenia Gravis,MG)和胸腺瘤等疾病的診斷中，主要用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中的肌聯(lián)蛋白抗體含量，試劑盒應(yīng)保存在2-8℃的環(huán)境中，有效期為6個(gè)月。
肌聯(lián)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒通常采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。這種方法通過(guò)預(yù)先包被豚鼠肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)捕獲抗體的微孔板，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品和HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌后，用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺與樣品中的肌聯(lián)蛋白抗體濃度呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，即可計(jì)算出樣品濃度。
在使用肌聯(lián)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒時(shí)，需按照以下步驟進(jìn)行：
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl。注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
2.溫育：用封板膜封板后，37℃反應(yīng)120分鐘。
3.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μl，37℃溫育60分鐘。再次洗滌后，每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100μl，37℃溫育60分鐘。洗滌5次。
4.顯色：依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色30分鐘。
5.終止：依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)。
6.測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
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